Revista médica e científica internacional dedicada a profissionais e estudantes de medicina veterinária.
Veterinary Focus

Número da edição 28.1 Nutrição

Controle de qualidade para dietas hidrolisadas

Publicado 29/10/2021

Escrito por Jérôme Naar e Isabelle Lesponne

Disponível em Français , Deutsch , Italiano , Polski , Español e English

Identificar e escolher uma dieta adequada para cães e gatos com reação adversa a alimentos não é algo tão simples e, por isso, alguns erros podem ser cometidos por puro desconhecimento. Neste artigo, o Dr. Jérôme Naar e a Dra. Isabelle Lesponne nos fornecem um breve panorama sobre como a Royal Canin garante que suas dietas “Anallergenic” estejam livres de proteínas indesejáveis.

Quality control for hydrolyzed diets

Pontos-chave

Estudos recentes destacaram que o conteúdo de muitas dietas que afirmam ser apropriadas para o manejo de reações adversas a alimentos é potencialmente inadequado para essa finalidade.


As dietas Anallergenic da Royal Canin são fabricadas de acordo com rigorosos padrões de qualidade que garantem sua idoneidade e adequação para os animais acometidos por reações adversas a alimentos.


As reações adversas a alimentos em cães e gatos são uma causa relativamente comum de consultas dermatológicas em clínicas veterinárias. As dietas comerciais para reações adversas a alimentos são frequentemente utilizadas tanto para o diagnóstico (mediante o teste de eliminação) como para o tratamento da condição. Para isso, existem duas amplas categorias de dietas disponíveis:

1. Dietas com uma fonte de proteína “selecionada” ou “nova”, contendo uma quantidade limitada de fontes proteicas e – idealmente – uma única fonte de carboidratos.

2. Dietas hidrolisadas contendo proteína parcial ou extensamente hidrolisada.

Os testes com dieta de eliminação podem estar sujeitos a várias falhas em potencial, ou seja, alguns erros podem ser cometidos durante a sua realização. Os principais motivos de preocupação com uma dieta de eliminação são que ela esteja livre de qualquer outra proteína (na fabricação de alimentos para pets, deve-se prestar uma atenção especial à possível contaminação cruzada) e se ela corresponde a uma dieta com proteína hidrolisada que garanta um nível de hidrólise suficiente a ponto de não ficar nenhum fragmento alergênico residual. Estudos recentes destacaram que algumas dietas comercializadas para o controle de reação adversa a alimentos (principalmente aquelas vendidas sem prescrição veterinária) contêm ingredientes e/ou proteínas de alto peso molecular não declarados no rótulo; por exemplo, foram encontradas diferenças entre o resultado das análises proteicas e as proteínas declaradas no rótulo em cerca de 75% das dietas testadas 1 2 3. Por esse motivo, para garantir a ausência de contaminação cruzada nos produtos, é necessário levar em conta três elementos-chave: (a) caracterização completa das matérias-primas, (b) equipamentos e processos de limpeza adequados para tal finalidade, e (c) controles analíticos ideais.

Recentemente, foi realizado um estudo para confirmar a composição proteica específica das dietas Anallergenic da Royal Canin para cães e para gatos (à base de proteína de penas de aves extensamente hidrolisada e amido de milho), bem como para avaliar a eficácia do processo de controle do risco de contaminação cruzada.

• A composição proteica é determinada por meio de técnicas cromatográficas, eletroforéticas e proteômicas de alta sensibilidade por um laboratório externo independente. Os resultados obtidos confirmaram o extenso nível de hidrólise proteica (Figura 1), a ausência de proteínas nos palatabilizantes (inclusive do revestimento do croquete [kibble]) e a inexistência de contaminação cruzada 4. Foi detectada a glicoproteína do amido de milho (amido-sintase unida a grânulos), a qual, apesar de ser ubíqua (i. e., presente em todos os lugares), não se conhecem os efeitos adversos em pets até o presente momento; por outro lado, não foram encontradas proteínas de transporte de lipídios (também conhecidas como proteínas transportadoras de lipídios ou proteínas de transferência de lipídios), cujo potencial alergênico é bem reconhecido. Foram obtidos os mesmos resultados para as dietas de cães e de gatos 4.

 
Figure 1. Protein electrophoresis on three different poultry-based raw materials, including the extensively hydrolyzed feather protein of Anallergenic diets.  Key:   • NHCM (non-hydrolyzed chicken meal): many proteins of varying molecular weight can be seen • EHPF (Anallergenic extensively hydrolyzed poultry feather): no band seen • MHPF (mildly hydrolyzed poultry feather): residual large proteins are seen • MW: molecular weight in kilodaltons (kDa)  Note: Free amino acids are not visualized by this technique. The artefact on the gel was a deposit before migration.
Figura 1. Eletroforese proteica de três matérias-primas diferentes à base de aves, incluindo a proteína de penas extensamente hidrolisada das dietas Anallergenic. Legenda: • NHCM (do inglês non-hydrolyzed chicken meal, farinha de aves não hidrolisada): podem ser observadas muitas proteínas de peso molecular diferente. • EHPF (do inglês extensively hydrolyzed poultry feather, proteína de pena de aves extensamente hidrolisada da Anallergenic): não se observa nenhuma banda na eletroforese. • MHPF (do inglês mildly hydrolyzed poultry feather, pena de aves levemente hidrolisada): são observadas macroproteínas residuais. • MW: do inglês molecular weight, peso molecular, em quilodaltons (kDa). Nota: através dessa técnica, os aminoácidos livres não são visualizados. O artefato no gel era um depósito anterior à migração.
Figure 2. Each production batch is tested to determine if there has been unwanted protein cross-contamination using a specific 3-step DNA-based analysis.  • Step 1: The total DNA content is measured and compared to a threshold established during a multicentre pre-clinical trial on dogs suffering from complex or refractory AFR ( 5 ).  • Step 2: If DNA levels exceed the threshold, PCR analysis is conducted to identify the type of protein contamination.  • Step 3: The concentration of the unwanted proteins is calculated from the total DNA measurement using the appropriate calibration curve. This is known as the “no protein pollution index” or NPPI. If the NPPI is at or below the acceptable threshold, the batch is released for sale; if the NPPI is above the acceptable limit the batch is discarded.
Figura 2. Cada lote de produção é testado para determinar se existe contaminação cruzada com proteínas indesejáveis, utilizando uma análise específica de DNA composta de três etapas. • Etapa 1: O conteúdo total de DNA é medido e comparado com um limiar estabelecido durante um ensaio multicêntrico pré-clínico em cães que sofrem de reação adversa a alimentos complexa ou refratária (5). • Etapa 2: Se o nível de DNA exceder o limiar estabelecido, efetua-se uma análise de PCR para determinar o tipo de contaminação proteica. • Etapa 3: A concentração da proteína indesejável é calculada a partir da medição total do DNA, utilizando uma curva de calibração adequada. Isso é conhecido como NPPI (do inglês No Protein Pollution Index, Índice Zero de Contaminação Proteica). Se o NPPI for igual ou inferior ao limiar aceitável, o lote será liberado para comercialização; se o NPPI estiver acima do limiar aceitável, o lote será descartado.

• Os riscos de contaminação cruzada são avaliados testando cada lote de produção através da análise baseada no DNA em três etapas específicas (Figura 2). Isso envolve a medição do conteúdo total de DNA na dieta e a comparação dos resultados com um limiar de conformidade estabelecido durante um ensaio multicêntrico pré-clínico 5. Se um nível de DNA for detectado acima desse limiar, realiza-se uma análise de PCR para identificar a fonte de contaminação. Para correlacionar o DNA com proteínas indesejáveis, empregam-se “curvas de calibração”, a fim de determinar a concentração real da proteína presente.

Desde o lançamento da dieta Anallergenic em 2011, esse método foi utilizado para testar mais de 2.500 lotes de produção, e todos estavam em conformidade com os padrões exigidos. Isso permitiu que os lotes fossem liberados da fábrica para a comercialização no mercado.

Agradecimentos ao Mars Petcare Central Laboratory (Laboratório Central da Mars Petcare), Aimargues (França), e ao Luxembourg Institute of Science & Technology (Instituto de Ciência e Tecnologia de Luxemburgo).

Graças às medidas rígidas de controle de qualidade (seleção cuidadosa das matérias-primas, protocolos estritos de fabricação e métodos de limpeza, bem como análises rigorosas de DNA), não existe contaminação cruzada nas dietas Anallergenic. Isso, juntamente com a extensa hidrólise proteica comprovada, permite garantir a eficácia e confiabilidade clínicas ideais de uso do produto para o diagnóstico e tratamento das reações adversas a alimentos 6 7 8.

References

  1. Horvath-Ungerboeck C, Widmann K, Handl S. Detection of DNA from undeclared animal species in commercial elimination diets for dogs using PCR. Vet Dermatol 2017;28(4):373-e86.
  2. Ricci R, Granato A, Vascellari M, et al. Identification of undeclared sources of animal origin in canine dry foods used in dietary elimination trials. J Anim Physiol Anim Nutr (Berl) 2013;97 Suppl 1:32-38.
  3. Roitel O, Maurice D, Douchin G, et al. High molecular weight proteins in hydrolysed dog foods. Vet Dermatol 2015;26:304.
  4. Lesponne I, Naar J, Montano M, et al. DNA and protein analyses support the clinical reliability of an extensively hydrolysed diet. Vet Dermatol 2017;28:11.
  5. Mougeot I, Weese H, Sauve S, et al. Clinical efficacy of a highly hydrolyzed poultry feather protein-based diet for canine AFR diagnosis and dietary management: a 12 case pilot study. In Proceedings, Waltham International Nutrition Sciences Symposium 2013.
  6. Bizikova P, Olivry T. A randomized, double-blinded crossover trial testing the benefit of two hydrolysed poultry-based commercial diets for dogs with spontaneous pruritic chicken allergy. Vet Dermatol 2016;27(4):289-e70.
  7. Boutigny L, Lesponne I, Feugier A, et al. Evaluation of a new extensively hydrolyzed poultry feather protein-based diet for the dietary management of feline adverse food reaction (AFR): a 15 cases pilot study. Poster, SEVC congress, Barcelona, 2017.
  8. Cadiergues MC, Muller A, Bensignor E, et al. Diagnostic value of home-cooked and an extensively hydrolysed diet (Anallergenic, Royal Canin, France) in the diagnosis of canine adverse food reaction: a randomized prospective multicenter study in 72 dogs. In: Proceedings, World Veterinary Dermatology Congress 2016.
Jérôme Naar

Jérôme Naar

O Dr. Naar tem formação em bioquímica, ciências ambientais e toxicologia e, em 2012, ingressou na Royal Canin como especialista na equipe de Qualidade e Segurança de Alimentos no Departamento de Pesquisa e Desenvolvimento. Leia mais

Isabelle Lesponne

Isabelle Lesponne

A Dra. Lesponne se formou na Faculdade Nacional de Veterinária de Toulouse em 2001 e trabalhou em clínica de pequenos animais por alguns anos, antes de se mudar para uma empresa farmacêutica veterinária em 2007. Leia mais

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